原理

根據(jù)細(xì)胞的密度差和沉降速度差進(jìn)行分離，由于新鮮細(xì)胞和陳舊細(xì)胞的核質(zhì)比有一定的差異，最終導(dǎo)致細(xì)胞的密度有所不同，通過(guò)超速離心使不同密度的細(xì)胞進(jìn)行層次分離，從而達(dá)到分離新、舊細(xì)胞的目的。

應(yīng)用

有效分離患者自身細(xì)胞和新近輸入的獻(xiàn)血員細(xì)胞，大大方便了大量輸血后患者紅細(xì)胞血型的準(zhǔn)確定型和臨床輸血不良的回顧性調(diào)查。

對(duì)于新發(fā)的白血病患者可以白血病發(fā)病后細(xì)胞和發(fā)病前細(xì)胞進(jìn)行分離，然后再分別進(jìn)行血型定型，從而推測(cè)出患者患病前的準(zhǔn)確血型。

患者直抗混合凝集應(yīng)用

同種抗體所結(jié)合的是供血者紅細(xì)胞，在病人發(fā)生免疫性溶血期間，輸入的供血者紅細(xì)胞其平均年齡一般比受血者的紅細(xì)胞為大。

通過(guò)分離，結(jié)合有抗體的供血者紅細(xì)胞大多沉至底層，由此顯示DAT 陽(yáng)性程度的較大差別

材料

· 微量紅細(xì)胞比積管

· 砂輪

· 封口設(shè)備：優(yōu)質(zhì)橡皮泥

· 一次性塑料吸管或Tip頭

· （加樣槍）

· EDTA抗凝的全血標(biāo)本

高速離心機(jī)示意圖

操作方法

將白膜層紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌三次，最后一次1000×g離心5min，在不破壞白膜層的情況下，盡可能的去掉上清。

將洗滌后的白膜層紅細(xì)胞吸出后混合，加入1-2根比積管中，留出5mm長(zhǎng)度封口用。

從血液加入端用橡皮泥將管底封死，擠出的血液用紗布吸走。

放入有編號(hào)（記錄編號(hào)與患者對(duì)應(yīng)）的離心槽中，注意平衡，擰緊內(nèi)蓋，關(guān)上離心機(jī)外蓋10000r/min，離心15-20min。

在距紅細(xì)胞柱頂（近心端）3mm處，切開(kāi)比積管（或在另一端用橡皮泥擠出約3mm血液），將此段紅細(xì)胞洗入鹽水管中三洗。

三洗后的紅細(xì)胞配制成1%（微柱法）或3%（試管法），進(jìn)行抗原鑒定。

注意事項(xiàng)

分離輸血后3天以上的標(biāo)本較好分離

在24小時(shí)分離的年輕紅細(xì)胞中仍存在供血者的紅細(xì)胞。

在48小時(shí)，除非短時(shí)內(nèi)輸了大量血液，一般供血者的血型抗原可在分離的年輕紅細(xì)胞群中消失。

輸血后短時(shí)內(nèi)分離出自身紅細(xì)胞是可能的。

只對(duì)產(chǎn)生正常數(shù)量的網(wǎng)織紅患者有效

對(duì)不能產(chǎn)生正常網(wǎng)織紅細(xì)胞輸出血患者無(wú)效，典型再生障礙性貧血的輸血患者無(wú)效。

網(wǎng)織紅細(xì)胞減少表示骨髓造血功能減低，常見(jiàn)于再障、骨髓病性貧血。

在衰老的網(wǎng)織紅細(xì)胞某些抗原表達(dá)減弱

一些抗原不能很強(qiáng)的表現(xiàn)出來(lái)，尤其在檢測(cè)E、e、c、Fy 、Jk 和Ge抗原時(shí)特別注意；

網(wǎng)織紅細(xì)胞上D抗原位點(diǎn)數(shù)約為成熟紅細(xì)胞的60%。

盡量避免破壞白膜層

紅細(xì)胞壽命約為120天。一般而言，進(jìn)入血循環(huán)中的紅細(xì)胞成為熟紅細(xì)胞，但也有一定比例的網(wǎng)織紅細(xì)胞。

網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量越多，其群體細(xì)胞的平均年齡越輕，反之則老。

盡量避免取到白細(xì)胞

· 白細(xì)胞直徑7~20μm左右

· 紅細(xì)胞7μm左右

· 過(guò)多白細(xì)胞造成假陽(yáng)性